生命科学和生物工程技术的迅速发展使得人们对核苷酸、核酸、以及氨基酸、多肽、蛋白质等生物分子的研究兴趣日益增加。这些生物活性分子是人类生命延续过程所必需摄取的成分,因此涉及它们的分离、分析问题也日益重要。
高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代末发展起来的一种分离分析新技术,适用于分析高浮点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物,并具有分离效率高、灵敏度高和分析速度快等优点。高效液相色谱法中的反相色谱法、体积排阻色谱法、亲和色谱色谱法、离子色谱法等均可以对上述生物分子进行分离分析。
随着分子生物学的不断发展及各种新技术的广泛应用,细菌的分类鉴定已从传统的表型特征描述深入到各种细菌细胞成分的化学分析和分子生物学鉴定。通过化学测定,可以获得细菌基因组和各细菌组分的化学数据,依据这些化学成分数据可以在对细菌做出精确鉴定,对许多菌株之间的亲缘关系做出判断。
每一种细菌DNA G+C 含量通常是恒定的,不受菌龄、生长条件等各种外界因素的影响,故它作为鉴定细菌种、属间的亲疏关系的重要指标已被人们所公认。测定DNA G+C 含量的方法已有众多研究报道,主要包括热变性温度(Tm)法、浮力密度法和HPLC 法,其中快速、准确的方法当数HPLC法。
HPLC应用于细菌的分子生物学鉴定和细菌细胞的化学成分分析可直接测定细菌DNA的碱基组成和细菌的化学组分,为细菌的分类鉴定提供有利的证据。因此,HPLC 在微生物鉴定中的应用越来越受到人们的关注。
随着氨基酸的广泛应用,对氨基酸的检测分析水平也在不断提高。由于HPLC技术无需特殊反应装置,高效、简便、快速、准确和价格低廉等优点,已广泛应用于多种生物样品内氨基酸的检测。
实验所用色谱柱常采用C18柱、C8柱以及CN柱,检测器使用紫外、荧光或电化学。氨基酸与不同生化试剂反应后产生不同的衍生物,不同衍生物所需色谱条件也有差别。HPLC已成为一种较为理想的检测氨基酸的方法。
生物活性肽以其特有的吸收机制、极强的活性和多样性成为国内外研究的热点,其分离与分析技术是生物技术实现产业化的重中之重。化学合成的肽产品是一个纯度不好的粗产品,其杂质与合成的肽在分子结构和化学性质上很相似,给肽的分离纯化带来了困难。因此,根据对目的肽的要求,需要选择适当的方法进行纯化。
高效液相色谱法是生物技术中分离纯化的重要方法,在多肽的分离纯化工艺中显示出优异的性能。而且,它已走出实验室投入到大规模的工业化生产中,成为生物技术范围内一有力高效的分离工具。
作为生物大分子的蛋白质,是一种长链高分子化合物,不仅分子量大,而且在溶液中的扩散系数小、黏度大、易受外界温度、酸度、有机溶剂的影响而并引起结构变化。这增加了蛋白质分离、分析的困难。
蛋白质在物理、化学及功能上的差异为蛋白质的分离检测提供了基础。用高效液相色谱法来分析蛋白质是一种近年来发展较快的新型分析方法。由于高效液相色谱柱的改进和HPLC技术的迅速发展,HPLC在蛋白质分析研究中越趋成熟。
随着现代科学技术的日益发展,生物技术尤其是近年来基因科学技术的突飞猛进,已使医药工业产生了巨大的变化。生物技术不仅提供着基因工程多肽药物和疫苗、诊断治疗用单克隆抗体等日益丰富的生物工业药物,并直接形成了初具规模的生物技术制药产业;而且还在新药筛选、改进现有药物的生产工艺,改良微生物药物的生产菌种、药物的手性合成技术等方面愈益发挥作用。
生物技术必须实现产业化才能取得应有的社会和经济效益,根据国际发展生物技术的经验和资料可知在医药领域中,下游技术在生物技术产品中所占比例极大,可以说,下游技术是新药高科技实现产业化的关键。而在制药工程的下游技术中,产品的分离纯化是其中最主要的组成部分。而高效液相色谱仪在生命科学和生物工程技术中的应用对建立一套完整的生物分子分离纯化技术具有重要意义。