高效液相色谱系统色谱分析中出现双峰的原因可参考几下几点：

色谱柱

在样品分析过程中，如果发现每个色谱峰有两个峰，特别是使用单一纯物质时，可以确定色谱柱存在问题，这通常是由于柱头损坏或柱头固定相污染所致。

如果进样量较小，原始色谱柱正常，色谱峰的形状大多是具有小的峰的大的峰，而不是某个尾部，一般情况下，色谱峰都是正确的。当然，没有反冲，正反冲有时是正常的。

如果峰后端和双峰强度差不小，柱头固定相变化变脏或损失概率较大，可以拧开样品注入头，用柱头刮除部分填充材料，再填充新填料，但技术要求高，不能频繁地完成，否则柱将由于柱效应降低而报废。

如果上述问题不能解决则可能是由于色谱柱坍塌造成的此时需要更换色谱柱。

溶剂问题

目前，HPLC分析大多采用反相高效液相色谱法，流动相为甲醇、乙腈、水和各种添加剂，以提高分离性能样品通常溶解在可溶于流动相的溶剂中最好的办法是在流动相中溶解在实际分析中，有时会为样品的溶解度或稳定性加入少量的缓冲液，缓冲液的酸性和碱性会导致样品的转变，从而产生双峰现象此时需要更换缓冲液，调整溶剂的pH值，或用流动相制备样品。

此外，应立即使用样品，以避免因样品溶液的有机相比和pH值的变化而引起的溶剂效应。

进样量

使用溶剂极性和强度高的试剂时，如纯甲醇、纯乙腈、纯乙醇，分析系统以水为主，如果进样量大，如20ul定量管，则单个纯物质会出现双峰，第二个峰会比第一个峰小（每次都不一样），并且保留时间会更早（注射量相对较少），注射量会减少一半以上，峰型就会正常。这是因为溶剂的极性与流动相的极性太大，并且流动相没有时间将其稀释到平衡。

另一个原因是注射量不一定很大，但绝对量很大。色谱图上的两个峰很接近，基本均匀，不拖尾（如果峰很快，也可能是色谱柱的问题）。稀释样品，然后注入样品，这是由于过量的注射和色谱柱过载造成的。

样品特性

由于化学结构的特点，有些样品具有互变异构现象，不能分离，但存在动态平衡在色谱分析中，在特定条件(如pH值、流动相极性、温度等)下，一种物质会出现双峰、双峰非常接近、基本高、不落后，条件变化不大，特别是pH、双峰现象会消失，如红霉素等。

有的样品在紫外色谱图上没有双峰，但在液相色谱-质谱联用下，用吡虫啉等质谱检测器，质谱的总离子流图更为明显。

pH值

pH值对色谱双峰的影响表现在各个环节，特别是在缓冲流动相平衡过程中连续进样时，由于pH值的不断变化，常常会出现这种双峰现象另外，在样品分析时，流动相的pH尽可能远离分析物的等电点，否则也容易引起双峰生产。当使用离子对试剂进行分析时，如果选择不好的条件，很容易产生双峰。

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